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来自 : 发布时间：2024-05-12

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Hanks液洗去残留的旧培养基，或用少量胰酶涮洗一下。8．每个大培养瓶加入1 mL胰酶，小瓶用量酌减，盖好瓶盖后在倒置显微镜下观察，当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶，使细胞脱离胰酶，然后将胰酶倒掉。注意勿使细胞提早脱落入消化液中。9．加入少量的含血清的新鲜培养基，反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散，再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基(7～10 mL／大瓶，3～5 mL／小瓶)制成细胞悬液，然后分装到新培养瓶中。盖上瓶盖，适度拧紧后再稍回转，以利于CO2气体的进入，将培养瓶放回CO2培养箱。 10．对悬浮培养细胞，步骤7-9不做。可将细胞悬液进行离心去除旧培养基上清，加入新鲜培养基，然后分装到各瓶中。Ana-1 细胞价格 小鼠巨噬细胞AGS 细胞价格 人胃腺癌细胞AE-2细胞价格 小鼠杂交瘤细胞抗AChEAE-1细胞价格 小鼠杂交瘤细胞抗AChEAcc-3 细胞价格 人涎腺腺样囊性癌细胞Acc-2 细胞价格 人涎腺腺样囊性癌细胞AAV-293 细胞价格 人胚肾细胞A9 细胞价格 小鼠皮下结缔组织细胞BEL-7402 细胞价格 人肝癌细胞Bcap-37 细胞价格 人乳腺癌细胞BALB3T3 clone A31 细胞价格 小鼠胚胎成纤维细胞B95-8 细胞价格 绒猴EBV 转化的白细胞B16 细胞价格 小鼠黑色素瘤细胞AsPC-1 细胞价格 人转移胰腺腺癌细胞AR42J 细胞价格 大鼠胰腺外分泌细胞品牌：Hyclone 货号：SV30087.01（南美普通胎牛血清）100ml品牌：Hyclone 货号：SV30087.02（南美普通胎牛血清）500ml品牌：Hyclone 货号：SH30084.03（澳洲来源胎牛血清）500ml品牌：Hyclone 货号：SH30070.03（无红色标签）（北美特级胎牛血清）500ml品牌：Hyclone 货号：SH30070.03E（带红色标签）（北美特级胎牛血清）500ml品牌：Hyclone 货号：SH30396.03（加拿大来源胎牛血清）500ml品牌：Hyclone 货号：SH30406.01（新西兰来源胎牛血清）100ml品牌：Hyclone 货号：SH30406.02（新西兰来源胎牛血清）500ml品牌：Hyclone 货号：SH30068.03（Hyclone活性炭处理胎牛血清） 500ml品牌：Gibco 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s液，碘酒【初代消化培养法】（1）准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。（2）布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。（3）处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。（4）剪切：用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞。（5）消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。（6）分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速（500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。（7）计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO23调整。（8）培养：置于36.5℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易生霉菌，每次换液时需要换新塞。【初代组织块培养法】《1》剪切：把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中，用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污，吸静Hanks液，用眼科剪反复剪切1mm3块为止。《2》摆布：用弯头吸管吸取若干小块，置于培养瓶中，用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底部，小块相互距离以0.5cm为宜，每一25ml培养瓶底可摆布20~30块。《3》轻轻翻转培养瓶，另瓶底向上，注意翻瓶时勿另组织小块流动，塞好瓶塞，置36.5℃温箱培养2小时左右（勿超过4小时），使小块微干涸。《培养》从微箱中取出培养瓶，开塞，46度斜持培养瓶，箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许，然后缓缓再把培养瓶翻转过来，让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块。置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后。再补加培养液。【传代培养法原理】细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。【材料和试剂】1）细胞：贴壁细胞株2）试剂：0.25％胰酶、DMEM 90%,德国SERANA胎牛血清 Fetal Bovine Serum 10%3）仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、培养瓶、吸管、废液缸等【操作步骤】1）吸除培养瓶内旧培养液。2）向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许，以能覆满瓶底为限。3）置温箱中2~5分钟，当发现细胞质回缩，细胞间隙增大后，立即终止消化。4）吸除消化液，向瓶内注入Hanks液数毫升，轻轻转动培养瓶，把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时，动作要轻，以免把已松动的细胞冲掉流失，如用胰蛋白酶液单独消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液冲洗，直接加入培养液。5）用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。6）计数板计数后，把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中，置温箱中培养。hFOB1.19人SV40转染成骨细胞株HaCaT人永生化表皮细胞株A431人皮肤鳞癌细胞株CNE人鼻咽癌细胞株MG69人骨肉瘤细胞株注意：换液时一半用我们的培养基，一半用你们的，以免细胞不适应而造成生长不好。